白色念珠菌在义齿软衬材料表面上发育的研究

依谷宁儿

　　【摘要】　目的　探讨白色念珠菌在义齿软衬材料上 的发育变化。方法　采用日本临床常用的7种软衬材料。通过测定培养基pH值变化讨论了白色念珠菌的发育情况。结果　虽然有一些材料 固有成分对白色念珠菌有一定的抑菌作用，但会随长时间的使用而显著劣化。结论　长期使用软衬材料必须做正确的义齿菌斑清除。
　　【关键词】　白色念珠菌　　软衬材料
　　牙槽骨严重吸收的患者通常难以接受普通的硬质基托，尤其是有局部压痛点的患者，使用软衬材料可以使局部受创的粘膜得到充分的恢复［1，2］，但是，软衬材料比普通的基托材料更易被污染［3］，尤其是以白色念珠菌为主体的义齿菌斑更易附着于软衬材料之上［4］。义齿菌斑可导致义齿性口炎、基牙的龋坏，近年来有报道由于误吸入口内细菌至肺部，从而导致吸入性肺炎［5，6］。本实验讨论了附着于软衬材料的白色念珠菌的发育情况，进而讨论了温度变化在白色念珠菌发育过程 中的影响。
材料和方法
　　软衬材料：使用丙烯酸自凝树脂Soften(以下简称SF)、Nissin Soft Reverse ( SR);硅树脂类自凝树脂Mollosil(MO)、Evatouch(EV)及Tockuyama Soft Relining (TSR)；硅树脂类热凝树脂Molloplast B(MB)；氟素类热凝树脂Kurepeet Dough(KD)等7种国外临床常用软衬材料。另外将热凝基托树脂作为对照组使用。所有材料均按照厂家要求凝和，为了得到相同的表面性状，采用了玻璃片压制凝和法，在材料的玻璃面上进行了白色念珠菌的接种。材料在切成10mm×10mm×1mm的试片进行12小时紫外线灭菌后用于实验。
　　热处理方法：备4℃和60℃二个恒温水槽，材料浸放时间为1分钟/次，分别浸放0、1，000、 10，000次后用于实验［7］。
　　实验菌：Candida albicans IFO1385株，将其接种于含250mM葡萄糖的酵母氮培养基进行培养，经对数增长期后，将浓度调整为1×105 cells/ml的菌液50μl接种于材料试片上。经 37℃、2小时培养后加入2ml萨布罗培养液，继续在37℃下培养120小时。每隔6小时测定一次 培养基的pH值，最后得到白色念珠菌的发育曲线。
结果
　　培养基pH值变化曲线：未作热处理的软衬材料中的某些成分对白色念珠菌的发育起到了一定的抑制作用，氟素类KD及硅树脂类热凝树脂MB显示了较强的抑制作用。但是常温自凝硅树脂类的EV、TSR、MO等则与基托树脂的抑制作用相同。而丙烯酸类的SF、SR的抑制作用则介于KD与EV之间。经过10，000次热处理后，各种材料之间的抑菌能力之差有所缩小( 图1)。

图1　培养基pH变化。从左向右依次为温度负荷0次、1，000次、10，000次
　　三变数(a,b,c)结果：a,b,c三个变数分别表示白色念珠菌的早期发育开始时间、发育速度及最大发育数值［8］。从图2a变数的结果可知，早期抑菌能力较强的MB及KD经过热处理后、其抑菌能力降低到了与其它材料相同的程度。通过b变数的结果可以看到除EV及SF以外，经过热处理后的所有材料上的白色念珠菌的发育速度都有增加。另外通过c变数的结果可以看到经过热处理后早期抑菌能力较强的MB、SF、SR及KD的最小pH值也降低到了与其它材 料相同的程度。

图2　培养基三变数的分析结果
讨论
　　白色念珠菌在发育过程中分解培养基中的碳水化合物而产生酸和二氧化碳，pH法 就是通过测量培养基的pH值来得到白色念珠菌的浓度，它具有简单、不需要昂贵的设备及检 验药品等优点，因此本次实验采用了pH法来讨论白色念珠菌的发育情况。
　　通过观察一个典型的白色念珠菌发育曲线，可以知道白色念珠菌在培养基中的发育大致分三个阶段：第一阶段：就是早期发育开始时间(a)，白色念珠菌的浓度在达到107 cell/ml(p H值大致为5.5)之前发育比较缓慢，因此产生的酸也就很少、培养基的pH值变化也很小。从发育曲线上看，这段时间的发育曲线与X轴大致呈平行状态。我们定义这段时间为白色念珠菌的早期发育开始时间。第二阶段：白色念珠菌的浓度到达107 cell/ml以后，其发育曲线呈斜向右下的直线，也就是说在较短的时间内pH值发生了较大的变化，这段直线与X 轴越接近垂直就说明白色念珠菌的发育速度越快，因此我们定义这段直线的倾斜角为白色念珠菌的发育速度(b)。第三阶段：培养基的pH值在达到一个最低值后，呈逐渐上升趋势，也就是说新增殖的细胞数量少于死亡的细胞数。那么这个最低pH值(c)就可以反映出培养基中 的最大念珠菌数。